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實驗操作指導(dǎo)

免疫親和柱使用小貼士

2020-03-18

1）上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高；?2）上柱樣品溶液中待測物含量勿超柱容量；?3）樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；?4）抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會對親和柱的回收率有一定的影響。親和柱在使用前如果在4-8℃環(huán)境下保存，也需要恢復(fù)至室溫在進(jìn)行實驗；?5）親和柱不要在無水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響親和柱的質(zhì)量；?6）親和柱保質(zhì)期為1.5年，儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結(jié)，會嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對親和柱的質(zhì)量影響很大。?7）樣品基質(zhì)類型影響檢測準(zhǔn)確性。通常針對不同類型的樣品產(chǎn)品說明書會有不同前處理方法。如：多次萃取，大量稀釋提取液后再將稀釋液上柱等。

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1）上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高；?2）上柱樣品溶液中待測物含量勿超柱容量；?3）樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；?4）抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會對親和柱的回收率有一定的影響。親和柱在使用前如果在4-8℃環(huán)境下保存，也需要恢復(fù)至室溫在進(jìn)行實驗；?5）親和柱不要在無水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響親和柱的質(zhì)量；?6）親和柱保質(zhì)期為1.5年，儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結(jié)，會嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對親和柱的質(zhì)量影響很大。?7）樣品基質(zhì)類型影響檢測準(zhǔn)確性。通常針對不同類型的樣品產(chǎn)品說明書會有不同前處理方法。如：多次萃取，大量稀釋提取液后再將稀釋液上柱等。

試劑盒使用小貼士

2019-07-23

1)ELISA試劑盒中的試劑要與室溫平衡后才能使用。通常提前回溫1小時，試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。檢測前注意標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品溶液溫度的一致性。?2)加液一般用微量移液器，按規(guī)定的量加入板孔中，注意加樣時的一致性。?3)如果樣品量比較大，加酶標(biāo)記物、抗體、底物溶液和終止液時可用多道移液器，使加液過程迅速完成。??4)ELISA反應(yīng)溫度一般在18-30℃，24℃最佳。具體操作時可根據(jù)實際情況來控制。如溫度低時，可放入恒溫箱內(nèi)孵育。如溫度過高，則需降低溫度或減短孵育時間。室溫孵育時，ELISA板只要平置于操作臺上即可。?5)洗板通常洗四次，次數(shù)太少可能洗不干凈，太多會造成吸光度值偏低，在洗板的過程之中，第一次和最后一次最重要，第一次拍板要盡可能把沒結(jié)合的物質(zhì)洗掉，最后一次拍板要盡可能把多余的水拍干。?6)反應(yīng)的溫度和時間是影響顯色的重要因素。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按說明書，力求準(zhǔn)確。?7)酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。?8)不同批次產(chǎn)品不能混用，否則會影響檢測結(jié)果。確保使用的是試劑盒中原裝的標(biāo)準(zhǔn)溶液。?9)樣品吸光度值比最大標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值更低時，樣品需要加大稀釋，并再次測定。?10）樣品基質(zhì)類型影響檢測準(zhǔn)確性。通常針對不同類型的樣品試劑盒說明書會有不同前處理方法。如：發(fā)酵類樣品待檢液調(diào)PH至6-7方可點板檢測，植物油脂類樣品待檢液需除脂后方可檢測。

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1)ELISA試劑盒中的試劑要與室溫平衡后才能使用。通常提前回溫1小時，試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。檢測前注意標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品溶液溫度的一致性。?2)加液一般用微量移液器，按規(guī)定的量加入板孔中，注意加樣時的一致性。?3)如果樣品量比較大，加酶標(biāo)記物、抗體、底物溶液和終止液時可用多道移液器，使加液過程迅速完成。??4)ELISA反應(yīng)溫度一般在18-30℃，24℃最佳。具體操作時可根據(jù)實際情況來控制。如溫度低時，可放入恒溫箱內(nèi)孵育。如溫度過高，則需降低溫度或減短孵育時間。室溫孵育時，ELISA板只要平置于操作臺上即可。?5)洗板通常洗四次，次數(shù)太少可能洗不干凈，太多會造成吸光度值偏低，在洗板的過程之中，第一次和最后一次最重要，第一次拍板要盡可能把沒結(jié)合的物質(zhì)洗掉，最后一次拍板要盡可能把多余的水拍干。?6)反應(yīng)的溫度和時間是影響顯色的重要因素。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按說明書，力求準(zhǔn)確。?7)酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。?8)不同批次產(chǎn)品不能混用，否則會影響檢測結(jié)果。確保使用的是試劑盒中原裝的標(biāo)準(zhǔn)溶液。?9)樣品吸光度值比最大標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值更低時，樣品需要加大稀釋，并再次測定。?10）樣品基質(zhì)類型影響檢測準(zhǔn)確性。通常針對不同類型的樣品試劑盒說明書會有不同前處理方法。如：發(fā)酵類樣品待檢液調(diào)PH至6-7方可點板檢測，植物油脂類樣品待檢液需除脂后方可檢測。